Методические рекомендации гематологический анализатор интерпретация анализов

Клеточный состав периферической крови у человека в норме достаточно стабилен, поэтому различные изменения его при заболеваниях имеют важное диагностическое значение. Из методов лабораторного исследования форменных элементов крови наибольшее распространение получил общеклинический анализ крови (общий анализ крови, гемограмма). Это исследование проводят в большинстве случаев амбулаторного обследования и практически всем стационарным больным.

Изменения клеточного состава периферической крови наблюдаются не только при патологии, но и при различных физиологических состояниях организма. На показатели крови могут оказать влияние физическая и эмоциональная нагрузка, сезонные, климатические, метеорологические условия, время суток, прием пищи и пр. Чтобы устранить влияние этих факторов, кровь для повторных анализов необходимо брать в одних и тех же условиях.

Под действием физических и химических факторов, с которыми сталкивается человек в современных экологических условиях, а также в своей трудовой деятельности, большинство изменений функции системы кроветворения имеет адаптационный характер. Лишь в крайних случаях эти изменения являются следствием выраженных повреждений. Выявить и правильно оценить адаптационные гематологические реакции на действие токсических факторов малой интенсивности трудно. Не всегда имеется четкая картина различных нарушений. Небольшие изменения количества клеток крови легко «теряются» среди физиологических колебаний, свойственных этим показателям, а сами изменения ограничены в своей направленности.

Патологические изменения крови крайне разнообразны и зависят не только от тяжести процесса, но и от общей реактивности организма и сопутствующих осложнений. Существенное влияние могут оказывать различные лечебные и диагностические воздействия: медикаментозное лечение, оперативные вмешательства, физиотерапия, лучевая терапия, диагностические процедуры.

При многих заболеваниях изменения крови имеют неспецифический характер. В этом случае их используют для динамического наблюдения за больным и в прогностических целях. Получаемым при клинико-лабораторном обследовании гематологическим показателям соответствуют хорошо осознанные, устойчивые представления, которые сложились в системе клинического мышления. Использование этих понятий в ходе обследования и лечения больного составляет неотъемлемый элемент лечебно-диагностического процесса.

В случае гематологических заболеваний исследование клеток крови приобретает первостепенное диагностическое значение. При этом лабораторное обследование необходимо проводить с учетом клинических данных и состояния больного. С помощью показателей клеток крови проводится дифференциальная диагностика, выбирается схема лечения, наблюдаются результаты терапии и т.д.

На распечатках результатов, выдаваемых современными гематологическими анализаторами, могут помещаться комментарии, описывающие возможную патологию, как например: ANISO — анизоцитоз, MICRO — микроцитоз, L SHIFT — смещение влево и т.д. Несмотря на то что морфология крови требует комплексной оценки, необходима интерпретация каждого параметра счета клеток крови в отдельности, а также совокупность клинико-диагностической значимости параметров гемограммы.

Гемограммой называют комплекс показателей, чаще всего получаемых в лаборатории при анализе цельной жидкой крови с помощью автоматизированных методов и дополнительного микроскопического исследования. Гемограмма обычно включает определение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, тромбоцитов, гематокрита, расчет эритроцитарных индексов, количества лейкоцитов, лейкоцитограмму и СОЭ.

Автоматические методы измерения сделали возможным ввести ряд дополнительных параметров: средний объем эритроцита (МСV — mean corpuscular volume), среднее содержание гемоглобина (МСН — mean corpuscular hemoglobin) и средняя концентрация гемоглобина (МСНС — mean corpuscular hemoglobin concentration). Особого внимания заслуживает показатель анизоцитоза эритроцитов — RDW (red cell distribution width), который является важным дополнительным критерием для диагностики и динамического наблюдения за результатами лечения пациентов с анемиями. Эритроцитарные индексы — средний объем эритроцитов (MCV), среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH) и средняя концентрация гемоглобина в эритроците были предложены в 1929 г. Максвеллом Уинтробом (Maxwell Myer Wintrobe) для оценки состояния красных клеток.

Для правильного клинического толкования параметров эритроцитов необходима комплексная оценка всех показателей в сочетании с другими лабораторными данными. С появлением анализаторов крови, регистрирующих множество параметров, интерпретация результатов анализа претерпела некоторые изменения. Некоторые из новых параметров, хотя и были приняты и используются в практике, до сих пор не имеют надежной шкалы показателей нормы. Это вносит существенные затруднения в трактовку результатов. Поскольку в настоящее время автоматизированный анализ крови становится все чаще первым этапом гематологического исследования и для врача важно уметь извлечь максимальную информацию из полученных данных.

Ряд показателей, входящих в общий анализ крови, нельзя признать совершенным. Число эритроцитов (·10 12 /л или Тэра/л) не вызывает возражений. Общее содержание гемоглобина в крови (г/л) при всей диагностической важности, не является точным показателем. Повышение концентрации гемоглобина может быть результатом истинной полицитемии или следствием потери плазмы. Снижение гемоглобина последует за уменьшением его синтеза, снижением количества эритроцитов или может произойти при гемодилюции. Раньше для уточнения причин этих состояний использовали цветной показатель (ЦП). Но если ЦП снижался и становился меньше единицы, это в равной степени указывало на:

— нарушение синтеза гемоглобина;

— снижение содержания гемоглобина в нормальных по объему эритроцитах;

— уменьшение среднего объема эритроцитов (микроцитоз).

Если ЦП вдруг оказывается более единицы, это не имеет отношения к синтезу гемоглобина, а зависит от преимущественного образования макроцитов. Таким образом, величина ЦП не может однозначно характеризовать синтез гемоглобина и его среднее содержание в одном эритроците. ЦП во многом зависит от объема клетки.

На величине ЦП основано деление анемий на гипо-, нормо- и гиперхромные. В гипохромных эритроцитах содержание гемоглобина снижено. Однако гипохромными, на основании вычисления ЦП, становятся эритроциты с нормальным содержанием гемоглобина (нормохромные), но с увеличенными размерами (макроциты). А к нормохромным относят эритроциты и с нормальным, и с пониженным содержанием гемоглобина (гипохромные), если пониженная концентрация в них гемоглобина компенсирует ЦП уменьшенным размером эритроцитов. Чтобы избежать подобной путаницы, было предложено заменить ЦП на MCH. Он отражает относительное содержание гемоглобина на единицу объема эритроцита и характеризует только синтез гемоглобина.

В зависимости от насыщения эритроцитов гемоглобином они могут быть нормо- и гипохромными.

Проблема нормальных величин в гематологии

Нормальные величины — результаты лабораторных исследований у заведомо здоровых людей. Нормальные величины служат ценными ориентирами для клиницистов, однако не могут служить абсолютными показателями здоровья и болезни, поскольку их значения для здоровых и больных людей нередко совпадают. Кроме того, результаты лабораторных исследований могут отличаться от истинных значений из-за ошибок измерений.

Опыт внедрения гематологических анализаторов в клинико-диагностические лаборатории показывает, что результаты, получаемые с их помощью, нередко входят в противоречие с устоявшимися в практике ЛПУ нормальными величинами.

Процедура установления нормальных величин какого-либо гематологического параметра Х включает в себя несколько этапов:

— выбор метода, с помощью которого будет производиться определение нормальных величин параметра Х;

— калибровка прибора, на котором будет производиться определение нормальных величин параметра Х;

— подбор здоровых доноров, в крови которых будет производиться определение нормальных величин параметра Х;

— измерение параметра Х у доноров;

— статистическая обработка полученных результатов.

Видно, что точное определение норм — весьма сложная и трудоемкая процедура, чреватая неоднозначностью и ошибками:

1. Выбор метода уже несет в себе ту точность, с которой могут быть установлены нормальные величины параметра Х. Если, например, устанавливать нормы концентрации эритроцитов с помощью камеры Горяева, то границы этих норм будут установлены с более чем 15% погрешностью, соответствующей таковой камерного метода.

2. Калибровка прибора — отдельная проблема (обсуждалась в разделе 6).

3. Зависимость значения многих параметров от пола и возраста требует обследования больших однородных половозрастных групп. Трудноразрешимой проблемой является установление нормальных значений у пожилых людей, когда различные заболевания затрудняют формирование однородных групп.

4. При измерении значений параметра Х необходимо тщательно контролировать правильность работы прибора, на котором производится измерение во время всего периода получения результатов. Также надо учитывать возможные ошибки преаналитического этапа взятия этих проб.

5. В результате статистической обработки, как правило, за границы нормальных величин принимаются следующие значения:

— нижняя граница нормальной величины = Х среднее – 2·CV,

— верхняя граница нормальной величины = Х среднее + 2·CV,

т.е. такие границы, в пределы которых попадает 95% всех измеренных значений. Это означает, что из 100 измеренных здоровых доноров у 5 человек значение исследуемого параметра может выходить за пределы нормальных величин!

Гемограмма, получаемая при исследовании на гематологическом анализаторе

Нормальные значения гемограммы взрослых, получаемые на гематологических анализаторах

Здесь и далее данные взяты из следующих источников:

1. Клиническая оценка лабораторных тестов: Пер. с англ. Под ред. Н.У. Тица. М: Медицина 1986, 480 с.

2. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. Пер. с англ. Под ред. В.В. Меньшикова. М: Издательство «Лабинформ» 1997. 960 с.

Гемоглобин

Материал для исследования: венозная или капиллярная кровь. Кровь берется с ЭДТА (К3ЭДТА).

Гемоглобин — основной дыхательный пигмент эритроцитов, способный нестойко связываться с кислородом и углекислым газом, что обеспечивает эритроцитам выполнение их основной функции — газообмена. Гемоглобин является хромопротеидом, состоящим из белка глобина и гема — соединения протопорфирина IX с железом. Гем придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп приводит к изменению окраски, на этом основано определение концентрации гемоглобина в крови. Значение гемоглобина можно вычислить по гематокриту, однако диагностическая ценность в этом случае весьма ограниченна.

Метод Сали для определения гемоглобина в третьем тысячелетии применять не рекомендуется.

Концентрация гемоглобина в гематологических анализаторах определяется фотометрически гемиглобинцианидным или гемихромным методом.

Ошибки измерения концентрации гемоглобина. Завышение в результате:

— повышенной мутности сыворотки при гиперлипидемии;

— избытка нестабильных гемоглобинов (HbS, HbC).

Клинико-диагностическое значение

Повышение концентрации

Первичные и вторичные эритремии

Обезвоживание

Снижение концентрации

Гипергидратация

Анемии определяются как снижение общего количества гемоглобина. При диагностике анемий всегда следует соотносить значение показателя с возрастом и полом пациента. Диагностика типа анемии требует проведения дополнительных биохимических и гематологических анализов.

У больных, у которых гемоглобин выше 75 Г/л, препараты железа могут вызвать в течение 10 дней рост гемоглобина на 20-30 г/л (это не означает компенсацию дефицита железа).

Читайте также:  Норма параметров общего анализа крови

Переливание 500 мл крови (или 1 единицы эритроцитной массы — около 300 мл) больному массой тела 70 кг вызывает увеличение гемоглобина на 12 Г/л.

Эритроциты

Материал для исследования: венозная или капиллярная кровь. Кровь берется с ЭДТА (К3ЭДТА).

Эритроциты — являются наиболее многочисленной группой форменных элементов крови.

У взрослых их содержание составляет около 5 млн/мкл. Зрелые эритроциты не содержат ядра и органелл, они приблизительно на 35% заполнены гемоглобином. Для эритроцитов характерен относительно низкий уровень обмена, что обеспечивает им довольно длительный период жизни — 100-120 сут.

Ежедневно у человека подвергаются деструкции и погибают около 200 млрд эритроцитов.

Определение количества эритроцитов проводят в счетной камере и с помощью счетчиков или анализаторов клеток крови. Используя так называемое «правило трех», можно по количеству эритроцитов (RBC) оценить концентрацию гемоглобина и показатель гематокрита. 3·RBC=Hb, 3·Hb=Ht. Эту зависимость можно использовать для оценки параметров крови, но только в тех пробах, где эритроциты имеют правильное строение.

В результате ряда последовательных клеточных превращений из эритробласта образуется эритроцит. Процесс сопровождается накоплением гемоглобина и изменениями ядра (конденсация хроматина, исчезновение ядрышек), а заканчивается выталкиванием ядра из клетки. Когда ядро покидает клетку, оставшегося содержимого клетки объемом 90 фл недостаточно, чтобы заполнить клеточную мембрану, площадь которой составляет 150 мкм 2 , а вместимость около 180 фл. В результате эритроцит приобретает форму двояковогнутого диска (дискоцит) диаметром 7-8 мкм и толщиной 1,8-2,0 мкм (рис. 1). Рисунок 1. Форма и размеры эритроцита.

Площадь поверхности эритроцита двояковогнутой формы больше, чем если бы они имели форму шара, это позволяет эффективнее выполнять функцию газообмена, так как при такой форме диффузная поверхность увеличивается, а диффузное расстояние уменьшается. Кроме того, благодаря своей форме эритроциты обладают большей способностью к обратимой деформации при прохождении через узкие изогнутые капилляры диаметром 2-3 мкм. По мере старения клеток пластичность эритроцитов уменьшается. Пластичность понижена также у эритроцитов с патологически измененной формой (например, у сфероцитов и серповидных эритроцитов), что является одной из причин задержки и разрушения таких клеток в ретикулярной ткани селезенки.

Избыточная вместимость клеточной мембраны обеспечивает возможность значительного изменения объема эритроцита за счет осмотических явлений. Так, при помещении эритроцитов в гипотонический раствор вода проходит внутрь клетки и ее объем возрастает. В гипертоническом растворе наблюдается обратное явление.

В окрашенных препаратах эритроциты имеют форму дисков приблизительно одинакового размера с небольшим просветлением в центре (нормоцит).

Поскольку при автоматическом анализе эритроцитов в канал счета попадают еще и лейкоциты и тромбоциты, ошибка счета (увеличение) эритроцитов возрастает пропорционально лейкоцитозу, превышение количества лейкоцитов более 50 Г/л может искажать показатель среднего объема эритроцитов MCV.

Источник



Что они делают с нашей кровью? Это уже клиника!

Инфографика на конкурс «био/мол/текст»: Клинический анализ крови — самый распространенный лабораторный тест, назначаемый врачом, когда мы приходим на прием и жалуемся на плохое самочувствие. «Кровь из пальца, завтра с 8:00 до 9:30, натощак, N-ный кабинет», — такую фразу неизменно слышали несколько поколений. Однако технология исследования крови претерпела большие изменения за последние десятилетия и прошла путь от ручных методов к автоматическим. Разбираемся, как анализировали кровь вашей бабушки и почему сейчас все делается по-другому.

Конкурс «био/мол/текст»-2019

Эта работа опубликована в номинации «Наглядно о ненаглядном» конкурса «био/мол/текст»-2019.

Генеральный спонсор конкурса и партнер номинации «Сколтех» — Центр наук о жизни Сколтеха.

Спонсор конкурса — компания «Диаэм»: крупнейший поставщик оборудования, реагентов и расходных материалов для биологических исследований и производств.

Спонсором приза зрительских симпатий выступила компания BioVitrum.

Что будем исследовать?

Кровь — жидкая соединительная ткань организма, состоящая из плазмы и трех типов форменных элементов: эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. Лейкоциты, в свою очередь, бывают с гранулами в цитоплазме — это нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, — и без гранул — лимфоциты и моноциты. Для того чтобы отличить патологию от нормы, нужно знать, какова концентрация клеток крови, как они выглядят и какую функцию выполняют. Пришло время вспомнить, с кем мы имеем дело.

Рисунок 1. Форменные элементы крови [1–3]

Рисунок 2. На рисунке представлены: концентрации форменных элементов крови в норме; лейкоцитарная формула — процентное соотношение разных видов лейкоцитов в крови; скорость оседания эритроцитов; концентрация гемоглобина; гематокрит в норме [4].

Итак, специалисты анализируют относительное и абсолютное содержание клеток, их морфологические характеристики, распределение по объему крови и многие другие параметры. Эти показатели могут рассказать, способны ли клетки в полной мере выполнять свои функции, а если нет, то указать на причину их «неработоспособности» и послужить основой для постановки диагноза.

Рисунок 3. Исследование крови: тогда и сейчас

Вперед, в прошлое!

1965 год, 8 утра, в местной поликлинике очередь на анализы. Ваша бабушка сдала кровь, и лаборант относит ряд пробирок на исследование. Проследуем за ним в лабораторию и посмотрим, что там и как. В лаборатории мы видим врачей, склонившихся над микроскопами или работающих с пробирками. Без преувеличения можно сказать, что в молодости вашей бабушки глаз специалиста и микроскоп были основными инструментами для анализа крови. Определяют следующие основные характеристики крови: концентрация каждого типа форменных элементов, количество различных видов лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов и концентрация гемоглобина. Помимо этого, специалист рассчитывает гематокрит — отношение объема эритроцитов к общему объему крови [5].

По порядку рас-счи-тайсь!

Первым делом производится подсчет клеток и определяется их концентрация в крови. Подсчет эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов проводят в камере Горяева, названной в честь своего изобретателя. Камера Горяева — стекло с углублением и нанесенной сеткой, куда помещается разведенная в физрастворе капля крови. Для определения количества форменных элементов камеру помещают под микроскоп и считают клетки, находящиеся в больших и маленьких квадратах сетки. Для каждого типа клеток существуют свои правила подсчета и формула, по которой вычисляется их исходная концентрация с учетом разведения крови и количества квадратов сетки [6]. Изменение количества форменных элементов служит важным критерием для диагностики анемии, воспалительных и вирусных заболеваний, нарушений свертывающей системы крови и других патологических состояний [7].

Ты кто такой?

Другой этап исследования крови — дифференцировка лейкоцитов на популяции. Ей уделяется особое внимание: изменение концентрации определенного типа клеток говорит о конкретной патологии. Бактериальная инфекция, вирусы или аллергия? Лейкоциты подскажут, какой поставить диагноз и какое назначить лечение. Различение лейкоцитов доверяют только высококвалифицированному специалисту. Для начала мазок крови фиксируют в спирте и окрашивают по методу Романовского—Гимзы. Состав красителя подобран таким образом, что различные структуры клеток окрашиваются в разные цвета. Окраска зависит от способности компонентов красящей смеси связываться со структурами, содержащими кислоты или основания. Например, гемоглобин и гранулы эозинофилов приобретают красно-розовую окраску за счет эозина, а ядра форменных элементов и базофильные гранулы (имеющие сродство к основаниям) окрашиваются метиленовым синим и азуром в синий цвет [1]. Когда мазок готов, специалист в микроскоп исследует его и по внешнему виду определяет, к какому типу принадлежат разные клетки [8]. Наличие окрашенных гранул, особенности формы ядра, размер клетки — все параметры нужно держать в голове для безошибочной классификации. Обычно подсчитывали сто лейкоцитов с последующим вычислением процентного содержания, а для того чтобы не запутаться, использовали 11-клавишный счетчик [9]. Увидел в микроскоп клетку — нажми на клавишу с обозначением клетки данного типа, и в конце подсчета количество лейкоцитов каждого вида отобразится на экране счетчика [10].

Выпали в осадок

Еще одна характеристика, имеющая клиническое значение — скорость оседания эритроцитов (СОЭ). Это показатель, оценивающий скорость разделения крови на плазму и форменные элементы. В чем причина такого разделения? Макромолекулы, находящиеся в плазме крови, могут связывать одновременно два эритроцита друг с другом, в результате чего образуются «монетные столбики» [11]. Такие комплексы под действием силы тяжести оседают на дно пробирки, оставляя над собой слой прозрачной плазмы — это называется седиментацией эритроцитов. Увеличение скорости оседания эритроцитов указывает на патологические процессы, происходящие в организме, такие как воспалительные, инфекционные или онкологические заболевания [12].

Для определения СОЭ мировое признание получил метод Вестергрена, однако в России также был распространен метод Панченкова. Принцип работы методов одинаков, различаются только типы используемых пробирок. Кровь смешивают с антикоагулянтом — цитратом натрия — и помещают в капилляр — тонкую стеклянную трубочку. Эритроциты оседают на дно пробирки в течение часа, а затем измеряется высота столбика плазмы, образовавшегося сверху [13]. Таким образом получают скорость оседания эритроцитов, выраженную в мм/ч.

На вкус и цвет

Гемоглобин — красный пигмент эритроцитов, связывающий и переносящий кислород и углекислый газ. Снижение содержания гемоглобина в эритроцитах — причина анемий, сопутствующих целому ряду болезней. Концентрацию гемоглобина определяют визуально с помощью гемометра Сали. Прибор выглядит так: по центру — пробирка для анализируемой крови, а по бокам — окрашенные эталонные пробирки. В изучаемую кровь лаборант добавляет соляную кислоту — гемоглобин превращается в гемин бурого цвета. Затем кровь разводят дистиллированной водой, пока ее цвет (по субъективному мнению лаборанта!) не совпадет с цветом эталона. Уровень жидкости, получившийся в центральной пробирке, соответствует концентрации гемоглобина [14].

Как вы уже догадались, 50 лет назад при исследовании крови совершить ошибку было очень просто. Неверное определение вида лейкоцита или сбой при подсчете форменных элементов — все это приводило к неточным результатам анализа. Что было сделано для предотвращения ошибок? Вернемся в наше время и узнаем, как изучают кровь сегодня.

Времена меняются

Изменения видны уже на этапе забора крови: если раньше врач собирал кровь в несколько пробирок с реагентами, стеклянный капилляр и делал на стекле мазок, то сейчас используются совсем небольшие объемы — от 12 до 150 мкл [15] крови достаточно, чтобы исследовать ее по всем параметрам.

Читайте также:  Лаборатория анализы мичуринский проспект

Заглянем в современную гематологическую лабораторию. Ого! Все заставлено оборудованием, и лаборанта что-то не видно. Может, отошел приготовить себе кофе? Не успеет! Анализ крови будет готов за минуту, и прибор выдаст результат в виде бумажной ленты с числами и аббревиатурами, за которыми скрываются всевозможные параметры.

Современные гемоанализаторы подразделяются на несколько классов, в зависимости от того, что они умеют делать. Каждый последующий класс — новая ступень эволюции — быстрее, точнее, совершеннее. Использование комбинации технологий творит чудеса: если первые анализаторы могли определять восемь параметров крови и не различали виды лейкоцитов [16], то новейшие приборы способны дифференцировать до семи популяций лейкоцитов [17] и в общей сложности исследовать более 40 характеристик крови.

Как сказал Артур Кларк: «Любая достаточно развитая технология неотличима от магии». И действительно, подробнейший результат за столь короткий срок не может не удивлять. Но вся магия основана на физических законах. И хотя такие названия, как электрический импеданс, светорассеяние и фотометрия на первый взгляд немного пугают, сейчас мы разберемся, какие принципы лежат в основе каждой технологии анализа.

Перепись населения

В середине прошлого века Уоллес Культер совершил революцию, запатентовав технологию автоматического подсчета клеток. Его именем назван один из лидеров в сфере производства гематологических анализаторов — компания Beckman Coulter [18]. Апертурно-импедансный метод (или метод Культера) основан на регистрации и анализе импульсов, возникающих при прохождении клетки через апертуру из одной емкости в другую, в каждой из которых находится электрод. Когда клетки в отверстии нет, через электролит между электродами свободно протекает ток под действием электрического поля. Чтобы направить клетки к апертуре, используют насос, откачивающий жидкость из одной емкости, в нее и устремляются форменные элементы. Проходя через апертуру, клетка вытесняет из одной емкости в другую объем электролита, равный своему объему. При этом возникает импульсное изменение сопротивление (импеданса) — мембрана клеток создает препятствие для свободного протекания тока. Одновременно меняется и сила тока, которую регистрирует счетчик. Число возникших импульсов соответствует количеству форменных элементов, а высота импульса пропорциональна объему клетки [19]. Используя информацию о количестве и объеме форменных элементов, прибор может рассчитать гематокрит, среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, ширину распределения клеток по объему и многие другие параметры [15].

Разделяй и властвуй

Дифференцировку лейкоцитов на популяции можно провести с помощью счетчика Культера, однако возникает проблема — различные виды лейкоцитов близки по объему и схожая амплитуда импульсов не всегда позволяет точно установить тип клетки. Как быть? Для решения этой загвоздки подбирают сочетания реагентов, которые изменяют размеры клеток в разной степени так, что становится возможным их разделить [15].

Но наиболее распространенный способ дифференцировки — проточная цитофлуометрия [20]. Метод работает следующим образом: клетки, находящиеся в потоке, поочередно облучаются лазером, а возникающие при этом сигналы светорассеяния и флуоресценции регистрируются детекторами и анализируются. Для того чтобы правильно определить принадлежность к популяции, исследуют сразу несколько параметров. Так, рассеяние света под малым углом дает информацию об относительном размере клеток, а рассеяние света под прямым углом позволяет «заглянуть» внутрь клетки и изучить ее внутреннюю структуру — наличие гранул и форму ядра. Еще один параметр — флуоресценция — способен рассказать о количестве антигенов и их виде на поверхности клеток — такое точно не определить на глаз. В отличие от ручных методов дифференцировки, анализируются не 100–200 клеток, а десятки тысяч в секунду! И к каждому лейкоциту индивидуальный подход: гидродинамическая фокусировка способствует тому, чтобы клетки выстраивались в ряд и облучались в проточной ячейке поодиночке. Результат подсчета появляется на экране в виде диаграмм рассеивания, где клетки со схожими свойствами формируют кластеры.

Выпали в осадок: 2.0

Современные приборы умеют измерять СОЭ двумя принципиально различными способами. Первый — модифицированный метод Вестергрена. Принцип работы не изменился со времен вашей бабушки, но за счет автоматизации стал более быстрым и точным. Второй — измерение кинетики агрегации эритроцитов оптическим методом [21]. Происходит это так: в кровь добавляется антикоагулянт, пробирки с кровью помещаются в ротор, где происходит автоматическое перемешивание. После этого анализатор отбирает часть крови в микрокапилляр, где она ускоряется и резко останавливается (так называемый метод «остановленной струи»). Остановка вызывает агрегацию эритроцитов, и в этот момент с помощью фотометра определяется оптическая плотность крови — чем плотнее будут расположены эритроциты, тем меньше света пройдет через пробу. Прибор использует полученные данные и строит кривую седиментации — ее анализ позволит представить результат в привычных единицах измерения СОЭ [22], [23].

Фото на память

Для определения концентрации гемоглобина Международный комитет по стандартизации в гематологии рекомендует метгемоглобин-цианидный метод. Однако сейчас повсеместно применяется иное исследование, не использующее токсичный цианид. Знакомьтесь, SLS-метод. Назван он по основному реагенту — лауритилсульфату натрия. SLS разрушает мембраны эритроцитов, после чего связывается с группами гема и образует стабильные комплексные соединения. Они анализируется фотометрически — через пробу крови пропускают свет лазера. Комплексные соединения поглощают часть света, в результате этого интенсивность выходящего светового потока ослабевает. Затухание измеряют с помощью фотодатчика и полученные данные преобразуют в единицы концентрации гемоглобина [24].

Это не предел

Итак, в процессе нашего экскурса мы посмотрели, как осуществлялся анализ крови во времена наших бабушек и как это делается сегодня. Выяснили, что в настоящее время благодаря переходу на автоматические методы существенно повысилась скорость получения результатов, а главное, их точность! Следует отметить, что современная аппаратная диагностика позволяет решить значительно больше задач, чем это было возможно пару поколений назад, но и это — тоже не предел!

Источник

Гематологические исследования

Анализ выполняется на гематологических анализаторах фирмы SYSMEX.

2. Посчет тромбоцитов (на анализаторе и при микроскопии по Фонио)

Тромбоциты – безъядерные клетки крови дисковидной формы размером 2 – 4 микрометра. Тромбоциты выполняют ангиотрофическую и адгезивно-агрегационную функции и принимают участие в процессах свертывания и фибринолиза, обеспечивают ретракцию (уплотнение) кровяного сгустка. Они способны переносить на своей мембране циркулирующие иммунные комплексы, поддерживать спазм сосудов. При активации тромбоциты приобретают сферическую форму и образуют специальные выросты (псевдоподии), с помощью которых они соединяются между собой (агрегируют) и прилипают к поврежденной стенке сосуда (способность к адгезии). Активированные тромбоциты выбрасывают содержимое своих гранул в кровяное русло: факторы свертывания, пероксидазу, серотонин, ионы кальция, АДФ, фактор Виллебранда, тромбоцитарный фибриноген, фактор роста тромбоцитов, которые участвуют в процессе свертывания.

Анализ включает в себя определение следующих параметров:

PLT -Общее количество тромбоцитов (х10 9 /л)

PDW — Ширина распределения тромбоцитов по объему (%)

MPV — Средний объем тромбоцитов (фл)

P-LCR -Количество гигантских ( ˃12 мкм) тромбоцитов (%)

Тромбоциты по Фонио (х10 9 /л)

Анализ выполняется на гематологических анализаторах фирмы SYSMEX и с помощью микроскопа фирмы OLIMPUS.

Подсчет количества тромбоцитов осуществляется двумя методами:

— на гематологическом анализаторе окрашенных специальным красителем тромбоцитов (оптический метод)

— при световой микроскопии окрашенного мазка крови с использованием иммерсионного масла

* Анализ выполняется совместно с клиническим анализом крови.

ПОКАЗАНИЯ К НАЗНАЧЕНИЮ

  • Тромбоцитопении
  • Тромбоцитоз

ПРИЧИНЫ ТРОМБОЦИТОЗА (увеличение количества тромбоцитов)

Реактивный тромбоцитоз (носит временный характери вызван активацией кроветворения)

  • После спленэктомии ( 3 -6 месяцев)
  • После острой кровопотери (кровоизлияния, оперативные вмешательства)
  • После острого гемолиза
  • При злокачественных новобразованиях
  • Ревматоидный артрит
  • Язвенный колит
  • Остеомиелит
  • Туберкулез

Опухолевый тромбоцитоз (при миелопролиферативных заболеваниях)

  • Миелоидный лейкоз
  • Эритремия
  • Идиопатическая геморрагическая тромбоцитоемия

ПРИЧИНЫ ТРОМБОЦИТОПЕНИИ (уменьшение количества тромбоцитов)

  • Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура
  • Гипо- и апластические анемии
  • Ауто- и имунные гемолитические анемии
  • Лейкозы
  • Метастазы рака в костный мозг
  • Дефицит витамина В12 и фолиевой кислоты
  • Лекарства
  • Вирусные инфекции (в т.ч. системная красная волчанка)
  • Лимфопролиферативные заболевания
  • Протезирование клапанов сердца
  • Экстракорпральное кровообращение
  • Портальная гипертензия

3. Подсчет ретикулоцитов

Количество ретикулоцитов в периферической крови является показателем активности эритропоэза, то есть отражает эритропоэтическую активность костного мозга.

Анализ включает в себя определение 7 параметров:

RET% — Относительное количество ретикулоцитов (%)

RET# -Абсолютное количество ретикулоцитов (х10 9 /л)

IRF% — Относительное количество незрелых ретикулоцитов (%)

LFR% — Относительное количество зрелых ретикулоцитов (%)

MFR% — Относительное количество средних ретикулоцитов (%)

HFR% -Относительное количество больших ретикулоцитов (%)

RET – He -Содержание гемоглобина в ретикулоците (пг)

Анализ выполняется на гематологических анализаторах фирмы SYSMEX.

* Анализ выполняется совместно с клиническим анализом крови.

ПОКАЗАНИЯ К НАЗНАЧЕНИЮ

  • Анемии (критерий диагностики апластической анемии)
  • Диагностика эффективности эритропоэза
  • Оценка терапии неэффективного эритропоэза препаратами витамина В12, ЭПО, препаратами железа
  • Лейкозы
  • Миелодиспластические синдромы
  • Оценка состояния после трансплантации костного мозга

ПРИЧИНЫ РЕТИКУЛОЦИТОЗА (повышение количества ретикулоцитов)

  • Острая геморрагическая анемия (после острой кровопотери на 3-4 сутки)
  • Гемолитическая анемия
  • Эффективная терапия следующими препаратами:

витамин В12 (ретикулоцитарный криз на 5 – 8 день терапии)

препараты для лечения эритремии

препараты для лечения паркинсонизма

  • Гемолиз
  • Гемолитическая анемия
  • Талассемия
  • Малярия
  • Эритролейкозы
  • Метастазы в костный мозг
  • Успешная трансплантация костного мозга ( увеличение более чем на 20%)
  • Употребление допинга спортсменами (прием ЭПО)
  • Курение

ПРИЧИНЫ РЕТИКУЛОЦИТОПЕНИИ (снижение количества ретикулоциов)

  • Апластическая анемия
  • Анемии хронических заболеваний
  • Железодефицитная анемия
  • Сидеробластная анемия
  • В12-дефицитная анемия
  • Миелодиспластические синдромы
  • Опухолевые процессы в костном мозге
  • Нарушения работы щитовидной железы (микседема)
  • Тяжелые болезни почек (снижение эритропоэза)
  • Тяжелый алкоголизм
  • Хронические инфекции
  • Прием оральных контацептивов, противосудорожных препапратов

4. Определение СОЭ

Анализ включает в себя определение следующего параметра:

СОЭ -Скорость оседания эритроцитов (мм/ч).

Анализ выполняется по методу Панченкова как на анализаторе ROLLER,так и с помощью ручной методики.

5. Подсчет формулы крови (микроскопия)

Анализ включает в себя следующие параметры:

ПЯ % — Относительное количество палочкоядерных нейтрофилов (%)

СЯ % — Относительное количество сегментоядерных нейтрофилов (%)

Читайте также:  Мичуринск наш доктор анализы

ЛФ % -Относительное количество лимфоцитов (%)

МОН % -Относительное количество моноцитов (%)

ЭОЗ% -Относительное количество эозинофильных нейтрофилов (%)

БАЗ % -Относительное количество базофильных нейтрофилов (%)

Анализ выполняется путем подсчета групп лейкоцитов в окрашенном с помощью автоматической системы для окраски HEMATEK мазке крови при помощи световой микроскопии.

* Анализ выполняется совместно с клиническим анализом крови.

6. Определение свободного гемоглобина в плазме

У здоровых лиц в плазме содержится лишь незначительное (1—4 мг%) количество свободного гемоглобина. Это гемоглобин, выделившийся из закончивших свой жизненный цикл эритроцитов. Содержание свободного гемоглобина в плазме меняется в зависимости от интенсивности гемолиза и гемоглобинсвязывающей способности белков плазмы.

Анализ включает в себя определение следующего параметра:

Hb св. — Свободный гемоглобин (г/л)

Анализ выполняется на анализаторе HemoCue.

* Для расчета процента гемолиза, помимо определения свободного гемоглобина, нужен клинический анализ крови.

ПРИЧИНЫ ГЕМОГЛОБИНЕМИИ (повышенное содержание свободного гемоглобина в плазме крови)

Как правило, причиной повышения концентрации свободного гемоглобина являются состояния, при которых происходит повышенное разрушение эритроцитов:

  • Гемолитические анемии
  • Гемолитическая болезнь новорожденных
  • Гемоглобинопатии (серповидноклеточная анемия и ее варианты, талассемия, гемоглобиноз С),
  • Отравление гемолитическими ядами (чаще всего при укусах змей) с последующим развитием ДВС-синдрома
  • Гемолитические кризы в результате тяжелых посттрансфузионных реакций, при групповой или резус-несовместимости
  • Инфекционные заболевания (при малярии и как вторичный симптом при сепсисе)
  • Массивные ожоги (термические или химические)
  • Физиологическая гемоглобинемия (в результате воздействия на эритроидные клетки, расположенные в ткани легких или желудка при курении, гастрите, язвенной болезни).

7. Подсчет шизоцитов

Анализ включает в себя определение следующего параметра:

Шизоциты — (шт. на 10000 эритроцитов)

Подсчет шизоцитов (фрагментов эритроцитов) осуществляется при помощи световой микроскопии окрашенного мазка крови с использованием иммерсионного масла.

Источник

Расшифровка результатов клинического анализа крови

Клинический анализ крови — рутинный метод диагностики, который широко используется при обследовании больных, контроля лечения и в ходе скрининговых исследований. В рамках процедуры оцениваются количественные и качественные характеристики клеточных компонентов крови. На сегодняшний день в большинстве случаев анализ выполняют на специальных анализаторах, которые автоматически подсчитывают необходимые результаты и печатают их на бланках, используя англоязычные сокращения.

Эритроциты

Эритроциты, или красные кровяные тельца обеспечивают доставку кислорода ко всем клеточкам организма. В англоязычной литературе эритроциты называются “red blood cells”, откуда и происходит международное сокращение — RBC.

Для транспорта кислорода эти клетки содержат в себе гемоглобин, который умеет соединяться с ним при помощи химических реакций. Анализатор отражает следующие показатели, касающиеся этих процессов:

  • RBC — число эритроцитов в литре крови. Повышение этого показателя у человека может наблюдаться при различных новообразованиях, гормональных нарушениях, но гораздо чаще является результатом сгущения крови вследствие обезвоживания, ожогов, приема мочегонных и некоторых других причин. Снижение RBC отмечается при кровопотере, анемиях, нарушениях их образования или повышенного разрушения. Некоторое снижение числа эритроцитов при беременности является нормой.
  • HGB — общее содержание гемоглобина. Показатель растет вслед за повышением RBC и снижается по этим же причинам. Снижение HGB наблюдается также при гемодилюции — разведении крови, например, на фоне интенсивного внутривенного введения большого объема растворов. Уровень гемоглобина у женщин обычно меньше, чем у мужчин за счет физиологической кровопотери во время менструаций.
  • HCT — гематокрит. Это величина, которая отражает соотношение всех клеток крови к ее жидкой части — плазме. Поскольку 99% этих клеток составляют эритроциты, показатель используют для оценки именно их объема.

Эритроцитарные индексы

Помимо этого оцениваются, так называемые эритроцитарные индексы:

  1. MCV — средний объём эритроцита. До внедрения новых анализаторов точная оценка не проводилась, а результат обозначался как микроцитоз, нормоцитоз или макроцитоз — в зависимости от размеров клеток. Повышенный уровень MCV может говорить о дефиците витамина B12, фолиевой кислоты, гемолитических анемиях, пониженный — при железодефицитных и сидеробластных анемиях.
  2. MCH — концентрация гемоглобина в одном эритроците. В старых анализаторах с этой целью оценивали цветной показатель, который составляет 0.03 от MCH.
  3. MCHC — средняя концентрация гемоглобина в эритроцитарной массе, которая отражает степень насыщения RBC гемоглобином. Является самым стабильным показателем и может служить индикатором правильно выполненного анализа.

Все перечисленные показатели тесно связаны между собой и оцениваются в комплексе. Так например, кровотечение сопровождается потерей большого числа эритроцитов. Соответственно и общее содержание гемоглобина также снижается, но MCH может оставаться в норме. При таком заболевании, как железодефицитная анемия возникает небольшой дефицит эритроцитов при снижении гемоглобина и различных изменений в эритроцитарных индексах. Все возможные изменения в организме, связанные с содержанием эритроцитов перечислять не имеет смысла и врач расшифровывает результат, опираясь на знание тех процессов в организме, при различных заболеваниях.

Отдельным показателем, связанным с красными кровяными тельцами является скорость их оседания — СОЭ (в современных анализаторах — ESR). Это абсолютно неспецифический показатель, повышение которого говорит о каких-либо проблемах в организме, которые врачу нужно поискать. В ряде случаев, например при беременности, повышение СОЭ является физиологическим и считается вариантом нормы.

Лейкоциты

Лейкоциты — это большая группа разноплановых клеток, задача которых обеспечить защиту организма. В международной медицине часто фигурируют, как WBC — white blood cells (белые клетки крови). Именно этой аббревиатурой обозначается общее содержание лейкоцитов в бланке анализатора. Причиной повышения WBC служат различные повреждающие факторы: инфекции, травмы, ишемия и некроз тканей и другие. Проще говоря, повышение числа лейкоцитов говорит, что иммунная система активно включилась в борьбу с повреждением. В то же время низкие значения показателя могут говорить о недостаточности иммунитета под воздействием радиации, медицинских препаратов, некоторых вирусных инфекций, а также при заболеваниях, которые сопровождаются нарушениями образования или повышенным разрушением лейкоцитов.

Лейкоцитарные индексы

Помимо этого, в оценке содержания лейкоцитов используются лейкоцитарные индексы, или в старых бланках — лейкоцитарная формула. Общий клинический анализ с последней называется развернутым. Существуют несколько видов лейкоцитов, которые отличаются друг от друга по морфологии и функциональным особенностям. Лейкоцитарная формула отражает их процентное соотношение к общему числу, а в современных анализаторах выводится также абсолютное содержание каждого вида этих клеток. В бланке их можно распознать по следующим аббревиатурам:

  • LYM — лимфоциты;
  • MXD — агранулоциты (моноциты, базофилы и эозинофилы);
  • NEUT — нейтрофилы;
  • MON — моноциты;
  • EO — эозинофилы;
  • BA — базофилы.

Если после аббревиатуры стоит знак “%”, то речь идет о процентном, а знак “#” — об абсолютном их содержании. Изменения в лейкоцитарной формуле могут служить индикатором самых различных проблем в организме. Рассмотрим их подробнее.

Главной задачей нейтрофилов является фагоцитоз — поглощение чужеродных объектов и их разрушение. Они всегда устремляются к участкам воспаления и распада тканей, где и выполняют эту работу, поэтому повышенное их содержание свидетельствует об активном воспалении.

Помимо нейтрофилов функцию фагоцитоза выполняют макрофаги, в которые, в процессе своего развития, превращаются моноциты. Высокий уровень последних также служит маркером воспаления, обычно инфекционного характера.

Эозинофилы принимают участие в реакциях, связанных с аллергическим компонентом. Повышение их числа наблюдается при аллергозах, паразитарных инвазиях, некоторых инфекциях и онкологических заболеваниях.

Базофилы принимают участие в воспалении и аллергии, выделяя гепарин, гистамин и серотонин. Они крайне редко повышаются изолированно, хотя подобное явление при некоторых формах лейкоза несет тяжелое прогностическое значение.

Лимфоциты принимают активное участие в самых различных состояниях, включая иммунодефициты, аллергию, воспаление, аутоиммунные нарушения. Их высокое содержание может являться признаком детских инфекций, вирусных гепатитов, мононуклеоза, туберкулеза и целого ряда других заболеваний.

Оценка лейкоцитарных индексов, и лейкоцитарной формулы, требует понимания патологических и физиологических процессов в организме, и не должна проводиться только лишь на основании табличных данных. Категорически нельзя ставить себе диагноз, опираясь только лишь на результаты анализа.

Тромбоциты

Основная задача тромбоцитов — участие в остановке кровотечений. Они образуют первичную пробку в области повреждения сосуда и участвуют в формировании кровяного сгустка. В бланках автоматических анализаторов обозначаются аббревиатурой PLT, которая происходит от английского слова platelets (буквально, “блюдца”) за их своеобразную форму.

Снижение числа тромбоцитов может сопровождаться кровотечениями и является следствием таких заболеваний и состояний, как малярия, тромбоцитопеническая пурпура, злокачественные новообразования, ДВС-синдром и некоторых других.

Высокий уровень тромбоцитов может стать причиной чрезмерного тромбообразования и нередко не имеет видимых причин. В таком случае состояние обозначается, как эссенциальная тромбоцитемия. Помимо этого причиной тромбоцитоза могут выступать железодефицитная анемия, гемолиз, некоторые инфекционные и аутоиммунные заболевания, поражение костного мозга.

Работа с тромбоцитами в классическом анализе крови на этом исчерпывается, однако, автоматические анализаторы и в этом случае предлагают дополнительные диагностические возможности в виде следующих показателей:

  • MPV — средний объём тромбоцитов. Показатель, отражающий размеры клеток, которые напрямую зависят от их возраста. Повышенный MPV может свидетельствовать о гематологических заболеваниях, поражении селезенки, тиреотоксикозе, прогрессировании атеросклероза. Снижение показателя отмечается при некоторых генетических заболеваниях, инфаркта миокарда, детских инфекциях, химиотерапии рака и целого ряда других состояний.
  • PCT — отношение общего объема тромбоцитов к плазме крови (тромбокрит). Не является специфическим показателем, широко колеблется физиологически, но позволяет оценить риск развития кровотечений и тромбозов.
  • PDW — распределение тромбоцитов по объёму. Показатель не имеет самостоятельного значения и оценивается в связке с другими индексами.

Таблица нормальных показателей анализа крови

В заключении приводим таблицу основных нормальных показателей общего анализа крови у взрослых и детей. Напоминаем, что оценивать его результаты можно только в связке с данными осмотра, другими лабораторными данными, в том числе биохимическим анализом крови и инструментальными методами диагностики. Кроме того, референсные, то есть допустимые, значения зависят от типа и модели диагностического оборудования. При этом в бланке автоматического анализатора рядом с полученным результатом отражаются нормальные значения для конкретной модели.

Источник

On: